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包装

猫。なし。ee101

発注情報:

ストレージ:アーゼとプロテイナーゼkでソリューション- 20・度; のためのc1年間; 室温で他のコンポーネント( 15- 25・度であり、 c) 一年間。

説明

easypure®ゲノムdnaキットを提供し簡単で便利な方法を隔離するために高品質の品種からゲノムdna哺乳動物細胞、 組織、 e。 大腸菌や酵母。 細胞や組織、 酵素的に溶解させる。 dnaはきっとシリカ- ベースの列。 孤立したdnaは、 pcrに適した、 制限酵素消化と南部ブロッティング。

・雄牛; dnaまでもたらす15・ムー; g。

・雄牛;完全な汚染物質の除去や阻害剤。

・雄牛; dna20から50キロバイトの範囲。

・雄牛; カラムベースの浄化、 有機溶媒抽出またはエタノール沈殿なし。

キットの内容

手順

を開始する前に、 の適切な音量を追加する96-100%wb2にエタノール。

1.材料を準備する

・雄牛; 哺乳動物細胞

A) 接着細胞: を削除し文化からメディアによる細胞培養プレートや収穫trypisinまたは他の方法。 遠心分離により細胞を収集250で・回; g5分間、 上清てから削除する。

ろサスペンション細胞: 遠心分離により収穫細胞250で・回; g5分間。 上清を除去。

C)100を追加& ムー; lＬＢ２、 細胞へペレット、 ボルテックスにより完全に混和またはピペッティング。

オプション: 場合rna- 自由なゲノムdnaが必要とされる、 20を追加& ムー; アーゼにlysatel。

D) 20を追加& ムー; lにlysateプロテイナーゼk。 ボルテックスによって簡潔にチューブを混ぜる、 その後、 インキュベートする室温で2分間。

・雄牛; 哺乳動物の組織( 準備する55・度であり、 c水浴やヒーターを開始する前に)。

A) 転送・ル; 25mg( 脾臓・ル; 10mg) みじん切りするために、 組織、 無菌1.5mlのマイクロ遠心チューブ。

ろを追加100・ムー; lと20ＬＢ２・ムー; プロテイナーゼkl管への。 であることを確認する組織は完全に浸漬したチューブに。

C)インキュベートする55で専修度; cまで、 サンプルが完全に溶解させる( 3時間に必要とされているほとんどの組織; 6- 8時間または長くに必要とされているマウステール; を混ぜるlysate2~3の回毎正時)。

オプション: 場合rna- 自由なゲノムdnaが必要とされる、 20を追加& ムー; アーゼにlysatel、 インキュベートする室温で2分間。

D) 12遠心分離機で、 000・回; g5分間、 上清に転送、 無菌1.5mlのマイクロ遠心チューブ。

・雄牛;e。 大腸菌細胞( 準備する55・度であり、 c水浴やヒーターを開始する前に)。

A) 転送1~5ミリリットル細胞培養( ・ル; 2・回; 109) に1.5mlチューブとチューブ12で遠心分離します、 000・回; g1分間。 完全に上澄みを破棄。

ろを追加100・ムー; lと20ＬＢ２・ムー; チューブにプロテイナーゼkl。 ボルテックスresuspend、 細胞によってペレットまたはピペッティング。 c)インキュベートする55で専修度; c15分間。

オプション: 場合rna- 自由なゲノムdnaが必要とされる、 20を追加& ムー; アーゼをサンプルにl、 インキュベートする室温で2分間。

 ・雄牛; 酵母細胞( 準備する37・度であり、 c、 55・度であり、 c水浴やヒーターを開始する前に)

準備する新鮮なd- グルシトールバッファ( 1メートルソルビトール、 10mmedta、 14mm・β;- mercaptoethanol)。 lyticaseを準備。 a) 収穫酵母細胞( ・ル; 5・回; 107) 遠心分離により12で、 000・回; g1分間。 上清を破棄。

ろを追加500・ムー; ld- グルシトールバッファ、 lyticase15単位にペレット。 徹底的に混ぜる、 インキュベートするは37・度; のためのc1時間。

C)遠心分離機で5,000・回; g10分間。 上清を破棄。

D) 中のペレットresuspend100・ムー; lと20ＬＢ２・ムー; プロテイナーゼkl、 により完全に混和votexing。

E)インキュベートする55で専修度; c45分間。 オプション: 場合rna- 自由なdnaが必要とされる合計、 20を追加& ムー; アーゼにlysatel、 インキュベートする室温で2分間。

F)12遠心分離機で、 000・回; g5分間上清と転送にて無菌1.5mlのマイクロ遠心チューブ。 2.500を追加& ムー; lbb2,5秒間ミックスによってボルテックス、 インキュベートする室温で10分間。

3.チューブ遠心分離しますと転送簡潔にすべてのlysateにスピンカラム。 遠心分離機で12、 000・回; g30秒間。 通って流れる廃棄します。

4.500を追加& ムー; lcb2,12遠心分離機で、 000・回; g30秒間。 通って流れる廃棄します。

5.ステップを繰り返し4.6

。500を追加& ムー; lwb2( ことを確認するチェックをあなたが追加したエタノール) と12遠心分離機で、 000・回; g30秒間。 通って流れる廃棄します。

7.6ステップを繰り返し。

8.遠心分離します最大速度で空の列( ・ge; 12、 000・回; グラム) を除去するために残留2分間wb2。

9.スピンカラムを配置して無菌1.5mlでのマイクロ遠心チューブ。 50〜200を追加& ムー; lの溶出バッファ( に予熱され65・度であり、 c) または滅菌、 蒸留水( ph> 7.0,に予熱され65・度であり、 c) カラムにマトリックス。 インキュベートする室温で1分間。 遠心分離機で12、 000・回; g1分間に溶出、 孤立したゲノムdna。 オプション: より多くを得るためにdnaを繰り返すことによってステップ9。

10。 孤立した店でdna- 20・度; c。

ノート

・雄牛; あまりにも多くの起動を使用しないでください材料降る抽出性能に影響を与えます

・雄牛; カット、 組織の小さな断片として、 できるだけ、 場合に影響が溶解。 完全に溶解後、 スティッキーlysate外観をプレゼント、 ゼラチン状よりもむしろ外観。

・雄牛; 品質を確保するために、 抽出したdna、 新鮮な材料と使用を避ける繰り返し凍結融解で。 dna品質に依存し素材の種類と蓄積時間。

・雄牛; ユース滅菌チューブやピペットチップからのdnase汚染を避けるために。

・雄牛; あなたを実行ステップ5月第二溶出同じものを使用しまたは異なるチューブのマイクロ遠心チューブ。

援用

庚j、 ら。 2013.効率的な減衰のnk細胞・ndashする; 媒介される複数の遺伝的に肝障害を操りimmunogenesを使用することによって肝臓- 指示したベクトル。190( 9): 4821-9。イムノj.If=5.52.pmid: 23554312。

謝k、 ら。 2013.oxyr、 レギュレータに重要な酸化ストレスと過酸化水素phenazines生産性でchlororaphisgp72シュードモナス。168( 10): 646-653。  resmicrobiol。if=1.993.pmid: 23778235。

Q劉。 ら。 2012.識別のバクテリオシンsubtilosinaとは裏編みの損失で結果その高い- レベルでの生産amyloliquefaciensバチルス。。 163( 6- 7): 470-8.if=2.763.pmid: 22677773。

徐x。 ら。 2012。水溶性の低酸素症を誘導するdownregulationguanylylシクラーゼ・ベータ; 1mir-34c-5pによって。 163( 6- 7): 470-8.if=6.111.pmid: 23038777。

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