製品情報

包装

猫。 なし。er101

発注情報:

ストレージ:プロテイナーゼkソリューション、 dnaseiおよびdnアーゼi- 20反応バッファーでoのためのc1年間; 他の人のために室温1年間

説明

easypure®Rnaキットを提供し、 迅速かつ容易な方法を隔離するためにカラムベースのtotalrnaから動物細胞、 動物組織、 細菌、 と30〜40分における酵母。 細胞や組織、 酵素的に溶解させる。 dnadnaseで私が消化され。 シリカ膜には必ずrna。 洗濯後、 高品質で溶出させる欄からrna。 単離されたrnaの自由であるdnaとタンパク質汚染、 のための、 適切であるrt-pcr、 qrt-pcrと北部ブロット。

キットの内容

bb4の量

*bb4付き・ベータ;- mercaptoethanol: d10広告・ムー; l・ベータ;- mercaptoethanol1mlあたりのためのbb4,そしてそれ使用前に準備する必要があり。

手順

を開始する前に、 mlを96％48を追加- 100％エタノールにwb4,徹底的に混ぜる。

材料を準備する

、: 動物細胞

(a) 収集し細胞

サスペンション用セル( ・ル; 5・回; 106): 懸濁液の携帯に転送rnase- フリーチューブと遠心分離機で12000・回; のためのgで45minutesoc捨ててから上清。

のための癒着してセル( ・ル; 5・回; 106): トリプシンを切り離すことによって、 細胞、 懸濁液の携帯に転送rnase- フリーチューブと遠心分離機で12000・回; g5分間で4oc、 捨ててから上清。 アッパー、 または削除する培養培地、 加算しての適切な音量bb4

(b) 細胞溶解

を追加の適切な音量でbb4・ベータ;- mercaptoethanol*。 ピペット細胞を作るために緩いペレット。 のためのセル番号・ル; 1・回; 106、 ミリリットルbb40.3を使用する; のためのセル番号の間に1・回; 106と5・回; 106ミリリットルbb40.6使用。

(c) 均質化

細胞を作るペレットによって完全に分散で高速またはピペッティングボルテックス。

(d) 遠心分離機で12000・回; g5分間室温で上清と転送にきれいなrnase- フリーのチューブ。

b。 動物組織

(a) を使用したサンプルは、 液体窒素挽く、 その後転送組織に電力きれいなrnase- フリーのチューブ。 ミリリットルbb40.3を追加( bb4付き・ベータ;- mercaptoethanol*) と15・ムー; あたりのためにプロテイナーゼkl10mgの組織、 ボルテックスにより完全に混和。 インキュベートする10〜20分間56でoc。

(b) 遠心分離機で12000・回; g5分間室温で上清と転送にきれいなrnase- フリーのチューブ。

c。 細菌の細胞を

(a)。 遠心分離します細菌サスペンションログ内- ファージで細胞12000・回; g2分間で4oCペレットへ細菌cells(・ル; 1・回; 109)。 上清を破棄。

注: 上清場合は削除されない完全に、 それを阻害する可能性が、 細胞壁の中で消化第二ステップ。( b)。 100を追加& ムー; lte/リゾチームバッファ( リゾチームから1001mgを追加& ムー; teバッファーl) にペレット。 するために、 高速で渦を完全にresuspendペレット。

(c)。 350を追加& ムー; lとbb4・ベータ;- mercaptoethanol*てよく混合しによってボルテックス。 インキュベートする室温で5分間。

(d)。 ピペットは上下に5〜10倍た溶液- フリーチップを均質化するために、 ソリューション。

(e)。 遠心分離機で12000・回; g5分間室温で上清と転送にきれいなrnase- フリーのチューブ。

rna精製

以下のすべての遠心分離工程が行われて室温で。

(a) の細胞や組織の動物用: を追加の等量70％lysateにエタノール( 使用rnase- フリーのために水70％エタノール)。 細菌の細胞のための: 250を追加& ムー; l96-100%lysateにエタノール。

(b) を分散させるために徹底的に渦を形成する可能性が沈殿物エタノールを添加した後に。 遠心分離機ieflybrとaddlysateにすべてのスピンカラム、 遠心分離機で12、 000・回; g30秒間、 捨てるか、 通って流れる場合( ボリュームは以上のlysateスピンカラム、 このステップを繰り返し)。

(c) を追加500・ムー; lcb4にスピンカラム。 遠心分離機で12、 000・回; g30秒間。 通って流れる廃棄します。 オプション: ときにゲノムdna- 自由なrnaが必要とされる、 80を追加& ムー; dnアーゼilワーキングソリューション( ワーキングソリューションにより混合される10・ムー; lと70dnアーゼi・ムー; l反応バッファー)、 インキュベートする15分間室温で。

(d) ステップを繰り返し( c)。

(e) を追加500・ムー; lwb4( チェック確認するためにあなたが追加したエタノールに入れて) スピンカラム。 遠心分離機で12、 000・回; g30秒間室温で。 通って流れる廃棄します。

(f) ステップを繰り返し( d)。

(g) 遠心分離します最大速度で空の列( ・ge; 12、 000・回; g) 2分間室温でエタノールを除去するために、 残渣や空気乾燥後、 列数分間マトリックス。

(h) を配置し、 クリーンにスピンカラム1.5mlrnaseフリーのチューブ。 30から100を追加& ムー; lrnase- フリースピンカラムマトリックスに水、 インキュベートする室温で1分間。

(i) 12遠心分離機で、 000・回; gために2分間溶出rna。

(j)- 80で単離されたrnaを保管してくださいoc。

ノート

・雄牛; ていることを確認し・ベータ;- mercaptoethanolbb4に追加されました。

・雄牛; ていることを確認し96-100%b4トウが追加されているエタノール。

・雄牛; すべての遠心分離工程が行われて室温で。

援用

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