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包装

猫。 なし。cd101

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ストレージ:、- 70ocに半年

説明

トランス有能な10化学的には特別に設計されたセルのための化学変換のdna。 それ以上の効率を許可10変態を8Cfu/・ムー; gdna( によってテストされpuc19プラスミドdna)。 有能なセルは硫酸ストレプトマイシン( strに耐性r)。

遺伝子型

f-mcrA・デルタ;(Mrr-hsdRms-mcrBc)・φ; 80lacZ・デルタ; m15・デルタ;lacx74reca1ara・デルタ; 139・デルタ;(ara-レウ)7697ギャルuギャルkrpsL( strr) エンドa1nupg

特徴

・雄牛; 高い変換効率:> 108Cfu/・ムー; g( puc19dna)。

・雄牛; strr.

・雄牛; 青/white選択。

・雄牛; 遺伝子クローニングおよび毒性のプラスミドdnaの安定したレプリケーション。

手順

・雄牛; 雪解けのバイアル100・ムー; lトランス化学的に有能なアイス10上のセル、 アリコート50・ムー; lの細胞に予冷した1.5mlチューブ、 ターゲットにdnaを追加と、 管を静かに混和。 氷の上で細胞をインキュベートする30分間。

・雄牛; 熱- 衝撃細胞を、 4230秒間oc、 チューブを外して、 その後すぐに42からoc水浴と場所2分間氷の上に。 中にチューブを振らないこの手順。

・雄牛; 500を追加& ムー; l、 滅菌のsoc媒体またはlb培地( 抗生物質はありません) には、 チューブ、 よく混ぜると37で振るoのためのcで1時間200回転〜細胞が蘇生。

・雄牛; 要件に応じてその実験( プラスミド、 形質転換の組換えライゲーション製品)、 形質転換された細胞の異なるボリュームを追加に対応する抗生物質- を含むすすり泣きまたはlb培地。 形質転換された細胞を広げた上で選択的なプレート。 プレートを反転させる、 インキュベートするは37o一晩c。

ノート

・雄牛; 高効率を達成することができる変換を変えることによって、 細胞の直後に解凍。

・雄牛; 繰り返しを避けるを解凍。

・雄牛; ピペッティング細胞を避ける。

・雄牛; 穏やかなハンドリング手順全体のために必要です。

援用

張tg、 ら。 2013.分子クローニング、 特性評価のマイトジェン- 活性化プロテインキナーゼキナーゼ遺伝子( mkk4) とそのプロモーターナタネのから配列( アブラナ科のカンペストリスl。)。 1月13日。orgtiss植物細胞。if=3.633。

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