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猫。 なし。cd501

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説明

トランス携帯性、 化学的有能な1-t1ファージは特別に設計されたdnaの化学変換のための。 それ以上の効率を許可10変態を9Cfu/・ムー; gdna( によってテストされpuc19プラスミドdna)。

遺伝子型

f-・φ; 80(lacZ)・デルタ; m15・デルタ;lacx74hsdR(rk-mk+)・デルタ;reca1398エンドa1トン、

特徴

・雄牛; 高い変換効率:> 109Cfu/・ムー; g( puc19dna)。

・雄牛; 速い- 成長している、 倍加時間とコロニーが50分ほどで目に見える8~9時間。

・雄牛; への抵抗t5t1とファージ。

・雄牛; 青/white選択。

手順

・雄牛; 雪解けのバイアル100・ムー; lトランスファージ1-t1耐性化学的に有能な氷の上のセル、 アリコート50・ムー; lの細胞に予冷した1.5mlチューブ、 ターゲットにdnaを追加と、 管を静かに混和。 氷の上で細胞をインキュベートする30分間。

・雄牛; 熱- 衝撃細胞を、 4230秒間oc、 チューブを外して、 その後すぐに42からoc水浴と場所2分間氷の上に。 中にチューブを振らないこの手順。

・雄牛; 500を追加& ムー; l、 滅菌のsoc媒体またはlb培地( 抗生物質はありません) には、 チューブ、 よく混ぜると37で振るoのためのcで1時間200回転〜細胞が蘇生。

・雄牛; 要件に応じてその実験( プラスミド、 形質転換の組換えライゲーション製品)、 形質転換された細胞の異なるボリュームを追加に対応する抗生物質- を含むすすり泣きまたはlb培地。 形質転換された細胞を広げた上で選択的なプレート。 プレートを反転させる、 インキュベートするは37o一晩c。

ノート

・雄牛; 高効率を達成することができる変換を変えることによって、 細胞の直後に解凍。

・雄牛; 繰り返しを避けるを解凍。

・雄牛; ピペッティング細胞を避ける。

・雄牛; 穏やかなハンドリング手順全体のために必要です。

援用

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