製品情報

包装

猫。 なし。er601

発注情報:

ストレージ:で4lb10o暗所で1年間c、 室温で他の人々( 15oC-25oC)1年間のための

説明

easypure®キットのmirnaを提供し、 迅速かつ容易なカラムベースの方法を隔離するために小さなrna( ・ル; bp200) 細胞から、 組織、 新鮮な血液やウイルス。 サンプルはlb10により溶解して。 クロロホルムの添加はサンプルにアッパーに解決策を分離しています水相rnaを含む無色、 中間相と、 低い有機相。 rna( 28秒rrna、 18秒rrna、 mrna) で高分子量は必ずシリカ膜に。 小さなrnaに含まれる流れを通して- は、 具体的にバインドされているような特別なスピンカラムのmirna。 は、 他と比較したのmirnaの抽出法、 このキットを提供し強力な溶解能力、 大規模な抽出量、 高い特異性と広い応用。

キットの内容

サンプルの要件

手順

調整してください〜4冷却遠心機o事前にc、 とadd48mlを96％- 100％wb10エタノールに使用する前に。

必要な資料: クロロホルム、 96％- 100％エタノール

1.均質化

、。 接着細胞

1)培養皿ウォッシュで一回1・回; pbs。

2)1ミリリットルを追加しlb1010cmあたりに2培養皿、 インキュベートするのにしばらくに対して水平に均一に没頭する溶解バッファーを可能とし、 混乱させる細胞細胞。 セルに合格するとlysateピペットチップを介して数回( しっかりと接着細胞のための、 ピールオフ細胞は細胞へら)。

3)lysate細胞を含有するに転送のマイクロ遠心チューブ。 ピペットrepeatly上下を分散させるために表示可能なすべての沈殿物。

4)インキュベートする室温で5分間。

b。 サスペンション細胞

1)転送サスペンションなどの細胞培養皿にのマイクロ遠心チューブ。 サンプルを遠心分離で8,000・回; g2分間で4oc、 上清を破棄。

2)1ミリリットルを追加しlb1010あたりに7細胞。

3)repeatlyピペット上下無しまで可視lysate析出する中に存在している。

4)インキュベートする室温で5分間。

c。 動物の組織と植物材料

1)後の重量を量る、 迅速に伝達冷凍乳鉢に液体窒素でサンプル。 徹底的に粉末に挽く。 追加の液体窒素必要に応じて使用することができ。 不完全挽くrna収量と品質に影響することができ。

2)組織に転送します粉のマイクロ遠心チューブ。 1ミリリットルを追加しlb1050〜100mgの組織にあたり。 ホモジナイズ組織サンプルホモジナイザー付きピペットおよびrepeatly上下。

3)インキュベートする室温で5分間。

d。 血液

1)1ミリリットルを追加しlb10あたりに・ル; 200・ムー; 血液l、 ボルテックスにより完全に混和。

2)インキュベートする室温で5分間。

2.0.2mlクロロホルムを追加または50・ムー; リットル4- bromoanisolelb101mlあたりに。 チューブを振る手で激しく30秒間。 インキュベートする室温で3分間。

3.10時のサンプルを遠心分離、 000・回; gで15分間4oC。 混合物を分離してい下方に有機相ピンク、 相間、、 アッパーと無色rnaが含まれている水相。 水性アッパーの音量は約相50％- 60％lb10ボリュームの試薬( dnaの混入を避けるために、 は一部が水相に残すことができる、 チューブ)。

4.無色転送します、 アッパー相に新鮮なrnaを含むrnase- フリーのチューブ。 96％を追加- 100％エタノール( に等しい1/3ボリュームの転送され溶液) を転送され1帖溶液( e。 g。 200を追加& ムー; lの96％- 100％から600エタノール・ムー; l転送されソリューション、 いくつかの析出するこの瞬間に形成することができる)。 静かに混和によって反転チューブ。 以下のすべての遠心分離工程が行われて室温で。

5.lysateにすべてを追加し、 rnaスピンカラム、 遠心分離機で12、 000・回; g30秒間室温で、 して、 収集流れを通して-。

6.の量を測定します正確に流れを通して- に転送し、 クリーン1.5ミリリットルまたは2mlrnase- フリーのチューブ。 96％を追加- 100％エタノール( に等しい1.25ボリュームを経由して流れの) に管( e。 g。 を追加812.5・ムー; lの96％- 100％650にエタノール・ムー; リットルフローを介して、 いくつかの析出するこの瞬間に存在してもよい)。 静かに混和によって反転チューブ。

7.lysateにすべてを追加し、 スピンカラムのmirna、 遠心分離機で12、 000・回; g30秒間室温で、 捨てるか、 流れを通して- 場合( lysate量は以上の積載容積のmirnaをスピンカラム、 このステップを繰り返しまで、 すべてのlysateは適用された)。

8.500を追加& ムー; lwb10( チェック確認するためにあなたが追加したエタノールに入れて) スピンカラム。 遠心分離機で12、 000・回; g30秒間室温で。 通って流れる廃棄します。

9.8一度ステップを繰り返し。

10。 遠心分離機で列を12、 000・回; g2分間室温でエタノールを除去するために、 残渣や空気乾燥後、 スピンカラムのmirnaを数分間マトリックス。

11.スピンカラムのmirnaを配置し、 クリーンにrnase1.5mlフリーのチューブ。 30から50を追加& ムー; lrnase- フリースピンカラムマトリックスに水、 インキュベートする室温で1分間。

12.12遠心分離機で、 000・回; g1分間に溶出のmirna。

13.のmirna- 80で孤立を保管してくださいoc。

ノート

・雄牛; 徹底した渦がクロロホルムを添加した後に必要な性能を確保するために抽出。

・雄牛;使用される試薬を確保する有機( クロロホルム等の、 96％- 100％エタノール、 等。 rnaseの混入の自由であり)。 ユース滅菌、 使い捨てrnase- 自由なピペットのヒントやチューブ。

・雄牛;には適していない孤立のmirna定量化によって分光光度計

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