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包装

猫。 なし。dp101

発注情報:

ストレージ:2~8でoC( 20％エタノール) の二年間

説明

proteinisotm樹脂が使用されni-nta- 1のためのステップ精製histaggedのタンパク質。 を彼の- タグ付けされたタンパク質に結合するni2+陽イオン、 アールを上に固定化により樹脂ni-nta4金属- キレートサイト。 タンパク質が洗い流されるunbound後、 タンパク質は、 ターゲットによって回収される溶出勾配。 それはネイティブとの両方に適した浄化変性タンパク質。

樹脂仕様

手順

一般的に、 彼の- タグ付けされたタンパク質による精製proteinisotmNi-nta樹脂が含まれてい: カラム充填、 equilibration、 サンプルのローディング、 洗濯、 溶出と再生。

1.equilibration

クロマトグラフィーを持つ列equilibrate5- 10倍でボリュームequilibrationバッファのベッド。 彼の- タグ付けされた組換えタンパク質強い結合容量で、 または特異的結合を高めるために、 イミダゾールの濃度が低い( 10から20mm) に加えることができる、 equilibrationバッファ。

2.サンプルのローディング

一貫したサンプルバッファーとしてでなければなりませんでできるだけequilibrationバッファ。 カラムをブロックしないに、 サンプルまたは遠心分離する必要があり濾過する( 0.45・ムーであり、 m) ロードする前に。

3.洗濯

、カラムを洗浄とベッドの5- 10倍でボリュームequilibrationバッファして、 収集の流れを通して- 1本のチューブに。

4.溶出

二つの方法が一般的に使用される溶出で:

(1)溶出の標的タンパク質の異なる濃度とイミダゾール。 準備するイミダゾールの異なる濃度勾配と溶出equilibrationバッファを実行するために。

(2)溶出の標的タンパク質と異なるph値。 準備するequilibration付きバッファ異なるph値のための溶出型標的タンパク質。 タンパク質はの大半の範囲内でph4-ph6。

5.再生

樹脂はときに多く使用されてきた回、 結合を効率が低下して。 次のメソッドに適用することができる再生間の効率を向上させるために樹脂やタンパク質結合。

(1)2ベッド6guhclmのボリューム、 酢酸0.2メートル

(2)5ボリューム脱イオン水のベッド

(3)3ベッドのボリューム2％sds

(4)1ベッド25％ボリュームのエタノール

(5)1ベッド50％ボリュームのエタノール

(6)1ベッド75％ボリュームのエタノール

(7)5ベッド100％ボリュームのエタノール

(8)1ベッド75％ボリュームのエタノール

(9)1ベッド50％ボリュームのエタノール

(10)1ベッド25％ボリュームのエタノール

(11)1ボリューム脱イオン水のベッド

(12)5ベッドボリューム100mmのedta、 ph8.0

(13)10ボリューム脱イオン水のベッド

(14)5ベッドボリューム100mmのニーソ4

ノート

・雄牛; カラムをブロックしないに、 溶解バッファーを遠心分離した後、 でろ液をおく事が勧められる0.45・ムー; mフィルター。

・雄牛; のためのレシピequilibrationバッファ:

・雄牛; 可溶性タンパク質equilibration用バッファ

ミリメートル300nacl、 ミリメートル50リン酸ナトリウム緩衝液、 10mmイミダゾール、 10mmトリス- clph8.0

・雄牛; バッファequilibration含めるためのボディ

6guhclm、 ミリメートル100リン酸ナトリウム緩衝液; mまたは8尿素、 ミリメートル100リン酸ナトリウム緩衝液、 10mmトリス- clph8.0

援用

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王l、 ら。 2011.exoinulinase遺伝子クローニングのひずみからペニシjanthinellumb01とその高い- レベルでこぼすpichiapastoris。applmicrobiolj。if=2.196.pmid: 21895898。

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